RP 18 Säule

Seit 1983 ist WICOM ein zuverlässiger Ansprechpartner für Ersatzteile und Gebrauchsmaterialien, die Sie in der Gaschromatographie (GC) und Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) einsetzen. Dieses Verfahren wird eingesetzt, um schwerflüchtige, leicht zersetzliche oder stark polare Stoffe in ihre Komponenten zu trennen, zu identifizieren und zu quantifizieren. Weiter lesen...
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HPLC-Säule für die RP

Für die Reversed Phase (RP) mit C18 als Packungsmaterial finden Sie bei WICOM die zu Ihrem Bedarf passende HPLC-Säule von namhaften Herstellern wie Merck, Macherey-Nagel, Agilent oder Waters.

C18 als Packungsmaterial

Die Reversed Phase (RP) oder Umkehrchromatographie lässt sich für ein breites Spektrum an Analyten einsetzen und ist die am häufigsten eingesetzte Methode in der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC), da sie sowohl für polare als auch für unpolare Analyte eingesetzt werden kann. Sie wird Umkehrphase genannt, da die mobile Phase polar und die stationäre Phase unpolar ist, im Gegensatz zu den Polaritäten bei der Normalphase (NP). Als stationäre Phase wird ein Gerüst aus Silicagel, das auch als Kieselgel bekannt ist, oder ein Polymer eingesetzt. An dieses Gerüst sind die unpolaren Seitenketten (z.B. Alkylketten) kovalent gebunden, so dass sie sich hydrophob verhalten. Je länger die Kette wird, desto unpolarer werden die Phasen.

Kieselgel hat die folgenden Vorteile:

  • Mechanische Stabilität
  • Kostengünstig
  • Oberflächenmodifizierung ist einfach, preiswert & flexibel
  • Porengröße lässt sich eng verteilt einstellen.

Polymersäulen überzeugen mit folgender Eigenschaft:

  • Gegenüber den Kieselgelsäulen besitzen sie eine höhere pH-Stabilität und sind daher für stark saure oder basische Eluenden besonders geeignet (z.B. für die Gelpermeations-Chromatographie mit Styrol-Divinylbenzol als stationärer Phase).

Die Trennung wird sowohl durch Adsorptions – als auch durch Verteilungschromatographie erreicht. Eine Reversed Phase-C18-Säule lässt sich für zahlreiche Analysen einsetzen. Ausnahmen sind sehr polare und sehr unpolare Moleküle. Stark polare Moleküle wechselwirken möglicherweise nicht mit dem C18-Material und eluieren in der Totzeit. Dann sind C4-, CN-, Diol- oder Phenylphasen besser geeignet. Ist das zu untersuchende Molekül zu unpolar, bleibt er möglicherweise irreversibel an dem C18-Material haften und kann nicht mehr von der Säule eluiert werden. In diesem Fall empfehlen wir eine Silica-, CN- oder NH2-Phase. Sie finden in unserem Sortiment auch diese HPLC-Säulen.

Maße

Damit Sie die passende RP-HPLC-Säule für Ihre Analyse finden, erläutern wir Ihnen kurz weitere Werte. Bedenken Sie bei der Auswahl die Art und Größe der Analyten sowie die instrumentelle Ausstattung.

  • Partikelgröße: Partikelgrößen werden in µm gemessen. Kleinere Partikelgrößen haben den Vorteil einer besseren Auflösung, erhöhen aber den Gegendruck. Dagegen erzeugen größere Partikel einen geringeren Rückdruck im HPLC-System. Sind jedoch zu viele größere Partikel enthalten, verliert das Material seine Trennleistung aufgrund einer geringeren Bodenzahl. 
Eine einheitliche Partikelgrößenverteilung ist jedoch ebenso wichtig wie die richtige Größe des Partikels. Eine optimale Trennleistung erhält man bei einer möglichst kleinen Bodenhöhe.
  • Form des Säulenmaterials: Es gibt neben den häufig verwendeten vollporösen Phasen auch Coreshell-Phasen sowie Phasen mit kleinen Partikelgrößen für UHPLC (Ultra High Performance Liquid Chromatography). 
Die vollporösen Partikel besitzen häufig Korngrößen von 3, 5 oder auch 10 µm. Ihre gesamte innere Struktur ist porös und ähnelt einem Schwamm. 
Core-Shell Partikel besitzen einen festen Kern und nur die äußere Hülle ist porös. Dieser feste Kern führt zu einer erhöhten Trennleistung. Die Partikel haben eine einheitlichere Partikelgrößenverteilung und lassen sich dadurch besser packen, sind aber weniger belastbar als vollporöse Materialien.
  • Porengröße: Die ideale Porengröße hängt von der Größe des zu analysierenden Moleküls ab. Umso größer das Molekül ist, umso größer sollten die Poren sein. Porengrößen werden meist in Å angegeben, dabei entsprechen 10 Å =1nm. 
Für kleine Moleküle eignen sich Säulen bis zu 120 Å, für große Biomoleküle können beispielsweise Säulen mit Porengrößen von 300 Å eingesetzt werden. Je kleiner die Pore ist, desto mehr Oberfläche und somit mehr Möglichkeiten zur Wechselwirkung hat die Phase. Somit kann sie höher beladen werden.
  • Innendurchmesser & Länge: Entscheiden Sie je nach Art der Analyse und der Menge der zu analysierenden Substanz die Dimension der HPLC-Säule und beziehen Sie Ihre HPLC-Anlage in die Überlegungen mit ein.

Endcapping

In unserem Sortiment befinden sich zahlreiche HPLC-Säulen für die Reversed Phase Chromatography (RPC), die mit den Bezeichnungen "Endc" bzw. "Endcapping" ausgezeichnet sind.Letztere wurden entwickelt, da nach der Trennungsphase aus sterischen Gründen nicht alle Silanolgruppen umgesetzt werden: Das Säulenmaterial weist daher weiterhin einen polaren Charakter auf. Das kann zu Wechselwirkungen zwischen den restlichen freien Silanolgruppen und den polaren Gruppen der Analyten führen. Daher wurde die Hydrophobizität des Säulenmaterials erhöht, indem das RP-Säulenmaterial in einem zweiten Schritt z.B. mit Trimethylchlorsilan (Si(CH3)3) umgesetzt wird. Dieses bindet die freien Silanolgruppen und deckt sie unpolar ab.Wir bieten Ihnen HPLC-Säulen mit "Endcapping" von Merck und WICOM an.

Service

Sie haben Fragen zur Auswahl der passenden HPLC-Säule für Ihre Trenn-Verfahren? Sie haben außerdem Fragen zu unseren Versandkosten oder zur Lieferung? Treten Sie mit uns in Kontakt – rufen Sie uns an oder schreiben Sie uns eine E-Mail. Unsere Mitarbeiter beraten Sie kompetent, so dass Sie die passende Ausstattung für Ihren Labor-Bedarf erhalten. Wenn Sie unsere Preise sehen möchten, melden Sie sich bitte in unserem Onlineshop an.

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